Test sui residui di antibiotici: cosa sono e come rispettare al meglio la legislazione brasiliana

Gli antibiotici sono ampiamente utilizzati nei bovini per il trattamento di varie malattie infettive, come la mastite. Queste sostanze chimiche hanno il ruolo di uccidere o inibire la crescita di microrganismi che causano patologie nell'uomo o negli animali.

Pertanto, quando rileva la presenza di questi microrganismi nella mandria, il veterinario può utilizzare la gamma più diversificata di antibiotici disponibili per i bovini, a seconda del tipo di batterio o parassita che colpisce l'animale.

L'uso degli antibiotici è un'arma molto efficace per il controllo e l'eradicazione delle malattie, se usati correttamente e sotto prescrizione medica. Quando il trattamento viene eseguito in modo irresponsabile, senza monitoraggio veterinario, può innescare diversi problemi di salute pubblica.

Tra questi, il più famoso è la resistenza antimicrobica. Secondo l'OMS (Organizzazione Mondiale della Sanità), questa è una delle più grandi sfide di salute pubblica al mondo. Pertanto, i professionisti veterinari sono responsabili del controllo del trattamento degli animali e dei test per i residui di antibiotici nel latte per aumentare ulteriormente la sicurezza e la qualità della materia prima.

In questo scenario, i test sui residui di antibiotici sono metodi di controllo utilizzati per identificare la presenza di residui. In questo modo è possibile avere un maggior controllo sulla presenza di queste sostanze che interferiscono con la qualità del latte prodotto.

Le principali tipologie di test disponibili sul mercato possono essere suddivise in test rapidi o test di screening, che portano risultati qualitativi (positivi o negativi), e test di conferma, che comportano un iter più lungo.

Principali classi di antimicrobici 

Tra gli antibiotici più utilizzati nei bovini, possiamo citare le seguenti classi come le più utilizzate negli allevamenti:

• Beta-lattamici: Penicillina, Ampicillina, Amoxicillina, Cloxacillina, Ceftiofur e altre Cefalosporine;
• Tetracicline: Tetracicline, Ossitetracicline e Clortetracicline;
• Aminoglicosidi: streptomicina, neomicina, gentamicina;
• Macrolidi: Eritromicina, Tilosina, Tilmicosina;
• Sulfamidici e trimetoprina: Sulfametazina, Sulfadimetossina, Sulfatiazolo e più di 15 altri composti;
• Chinoloni: Enrofloxacin, Norfloxacin, Ciprofloxacin, Ofloxacin, Rosoxacin, Sparfloxacin, Floroxacin, Pefloxacin, Aminofloxacin, Lomefloxacin e altri composti.
• Anfenicoli: Cloramfenicolo, Florfenicolo, Tiamfenicolo;

Ma attenzione! Anche se le classi sono le stesse, non utilizzare antibiotici adatti alla medicina umana nei bovini. Non ci sono ancora studi sul periodo di rigetto. Quindi, segui le istruzioni del tuo veterinario sulla tua proprietà. 

Per il trattamento di eventuali infezioni batteriche o parassitarie che utilizzano antimicrobici, indipendentemente dalla via di somministrazione, possono essere presenti residui di questi farmaci nel latte, anche in piccole quantità.

Le vie di somministrazione più comuni nei bovini sono intramammaria, intrauterina, orale, muscolare o attraverso la pelle. Gli antibiotici vengono assorbiti nel flusso sanguigno dopo l'applicazione e possono quindi passare nel latte. 

Tipicamente, la presenza di antibiotici è associata alle seguenti condizioni:

• Uso fuori confezione, inappropriato o illegale;
• Mancanza di formazione dei dipendenti;
• Mancanza di registrazioni delle vacche trattate;
• Fallimenti terapeutici;
• Fallimenti in posologia, dose e forma di somministrazione;
• Diluizione di antibiotici nel latte;
• Errori di gestione;
• Mancato rispetto del periodo di grazia;
• Numero di figli, maggiore è, minore è il metabolismo;
• Produzione di latte, minore è la produttività, maggiore è la concentrazione di residui nel latte;
• Non scartare il latte delle mucche trattate.
  

La legislazione brasiliana è molto attenta in termini di monitoraggio dei prodotti agricoli e zootecnici. Così, il Piano nazionale per il controllo dei residui nei prodotti di origine animale (PNCRC) stabilisce i limiti massimi di residui (LMR) per il latte. 

I parametri LMR sono descritti nel Decreto 9013 di 2017. Questo documento normativo descrive il sottoprogramma di monitoraggio, indagine ed esplorazione per l'esecuzione del PNCRC.

Secondo il Decreto 9013, al suo articolo 248, il latte normale è quello che non contiene residui di prodotti per uso veterinario e contaminanti superiori ai limiti massimi stabiliti. Inoltre, il presente decreto descrive anche il Piano di campionamento e le modalità di raccolta, preparazione, confezionamento e invio dei campioni per l'analisi. 

Per il controllo corrente, ogni anno il Ministero dell'agricoltura, dell'allevamento e dell'approvvigionamento alimentare (Mapa) pubblica l'ambito degli analiti che devono essere monitorati, nonché il numero di campioni che la casa madre deve raccogliere.

Il primo errore che può capitare quando si effettua un test qualitativo è fare l'analisi subito dopo la mungitura. Ciò può generare falsi positivi, a causa di inibitori naturali presenti e attivi nel latte per un periodo massimo di 3 ore. 

Quindi, per evitare questo evento, il campione deve essere riscaldato a 80 °C per 5 minuti e quindi refrigerato. Questo inattiva gli inibitori naturali e previene un risultato falso positivo.

Ma come abbiamo accennato in precedenza, questi test di solito si svolgono ore dopo, già nel serbatoio dei camion, che arrivano all'industria casearia. 

Abbiamo visto finora che è di fondamentale importanza prestare attenzione alla refrigerazione durante il periodo di trasporto del campione di latte, vista la presenza di microrganismi psicotrofici.

È necessario disporre di questo controllo preventivo, prima di ricercare le ragioni dell'aumento di CMP nel latte, sia esso dovuto alla crescita batterica o all'aggiunta di siero.

Prendendo le precauzioni precedenti, il modo migliore per rilevare le quantità di CMP (caseinomacropeptide) avviene attraverso il metodo HPLC, acronimo di High Performance Liquid Chromatography.

Attraverso questa analisi è possibile percepire la qualità del latte e valutare la sua capacità di trasformarlo in prodotti derivati come formaggi e yogurt, che dipendono dalla caseina intatta.

Al Brasil, esistono diversi kit di rilevamento dei residui antimicrobici. Tuttavia, è necessario selezionare i test di screening più adatti alla propria situazione, in base ai limiti di rilevamento dei residui antimicrobici.

No Brasil, a Somaticell Diagnósticos trabalha com kits projetados para atender o mercado brasileiro, com as maiores proteções em termos de capacidade de detecção de drogas, cobertura de famílias detectadas, com 100% das necessidades descritas no PNCRC – Plano Nacional de Controle de Resíduos e Contaminantes- do MAPA, para garantir que os laticínios recebam o leite com resíduos abaixo da legislação, mas sem descartar leite bom como sendo leite contaminado.

Com os Kits 2 em 1 da Somaticell, é possível realizar o monitoramento adicional previsto na IN76 e na IN77, com coberturas de 90% ou 95%, ou 100% das drogas antimicrobianas comercializadas para vacas leiteiras.

Le analisi effettuate per identificare Beta-lattamici e Tetracicline riescono a raggiungere un'efficienza del 100%. Quindi, in base alle esigenze del cliente, i kit possono essere adatti per effettuare la diagnosi in allevamento.

Com relação a metodologia, os kits Somaticell Diagnósticos são baseados em Elisa (Enzime Linked Immunosorbent Assay), fabricados sob os mais rígidos padrões de qualidade e atendendo aos requisitos de limites de detecção exigidos pelo MAPA – Ministério da Agricultura- ANVISA – Agência Nacional de Vigilância Sanitária - e Codex Alimentarius.

In questo modo il Somaticell Lo strumento diagnostico è in grado, attraverso questi kit, di identificare Beta Lattamici, Tetracicline, Sulfonamidi e Fluorchinoloni, Aminoglicosidi, Macrolidi e Anfenoidi. UN Somaticell commercializza soluzioni, combinate o individuali per ciascuna delle famiglie di antibiotici commercializzati nel Brasil.

I test qualitativi per la rilevazione di residui di antibiotici possono identificare la presenza di queste sostanze anche in quantità inferiori a quella stabilita dal LMR. 

Cosa succede quando il residuo viene rilevato da questi test di screening? Significa che il test ha rilevato un valore di residui di antibiotici al limite di rilevabilità del metodo, che può essere vicino all'MRL (Maximum Residue Limit), o inferiore all'MRL.

Usando solo questi strumenti, il latte potrebbe andare automaticamente a smaltimento, giusto? 

Il protocollo per lo smaltimento del latte non idoneo al consumo umano deve essere comprovato dall'inequivocabile certezza che la concentrazione nel prodotto sia di fatto superiore alla normativa. Per questi casi, alcuni paesi stabiliscono una procedura ufficiale per assistere le industrie nell'applicazione di questo protocollo, cosa che purtroppo non avviene Brasil.

Per maggiore chiarezza sull'argomento, utilizzeremo le definizioni FIL-IDF sull'argomento:

FALSI POSITIVI:

• Definizione: il metodo dà il risultato come positivo, ma l'analita – sostanza bersaglio – non è presente;
• In questo caso abbiamo un risultato falso positivo, in quanto non vi è alcun residuo nel campione analizzato;
• Cause principali:

       - Latte anormale – latte acido;

       - Elevata concentrazione di solidi nel campione, ad es. siero concentrato;

       - Alte cellule somatiche;

       - Alto contenuto di grassi.

FALSI NEGATIVI

• Definizione: il metodo dà esito negativo, ma l'analita – sostanza target – è presente e superiore alla norma;
• Quando un metodo afferma di rilevare principi attivi, ma l'esito negativo non significa che i residui presenti al di sopra della norma (legislazione brasiliana) siano assenti;
• Cause principali:

       - Metodo poco dimensionato allo scopo

       - Esempio 1: il metodo microbiologico che mira a rilevare più droghe è convalidato solo per beta plus tetra e darà la falsa impressione di latte sicuro, anche con la droga presente nel latte al di sopra del LMR.

       - Esempio 2: metodo per beta lattamici che rileva cefalexina a 500ppb, mentre la norma è 100 ppb, cioè un risultato negativo non garantisce il rispetto della norma.

FALSE VIOLAZIONI

• Definizione: il test rileva residui di antibiotici, il residuo è effettivamente presente, il risultato è classificato come positivo, ma il livello di residui di antibiotici è inferiore alla legislazione brasiliana;
• Causa: Questo è il tipico caso della capacità di rivelazione al di sotto dell'LMR, che è dovuta alla capacità di reazione tra anticorpo/enzima e che dipende dalle reazioni incrociate tra l'anticorpo e l'antibiotico e dalle stereointerferenze chimiche tra le diverse molecole degli antibiotici e dei recettori (anticorpo/enzima), che possono accoppiarsi in modo diverso e quindi causare rilevamenti non lineari tra i diversi componenti di ciascuna famiglia;
• Esempio: In kit 2in1 Beta+ Cephalexin+ Teracilcine abbiamo la rilevazione di Penicillina a 2 ppb (50% del MRL) e di Ceftiofur a 80ppb (80% del MRL), a dimostrazione del verificarsi di diverse cross-reazioni tra le diverse molecole e l'anticorpo.
  

Per una determinazione esatta e precisa della concentrazione di residui di farmaci veterinari vale la metodologia quantitativa indicata nell'art Brasil e in altri paesi è HPLC MS/MS (cromatografia liquida ad alta prestazione con rivelatore massa/massa), che riesce a quantificare quantità a livello di ppbs (parti per miliardo o mg/l per esempio). Si scopre che questo tipo di apparecchiature è difficile da utilizzare, in quanto richiede tecnici altamente specializzati, elevati investimenti, bassa capacità per il numero di analisi e lunghi tempi di risposta, rendendo Brasil, ad esempio, abbiamo pochi centri in grado di svolgere questo tipo di analisi, situati in regioni lontane da grandi bacini lattiero-caseari.

Di conseguenza, abbiamo un tempo medio per eseguire un campione quantitativo di circa 15 giorni, dalla raccolta al risultato. In pratica ciò significa che questo tipo di analisi serve solo come analisi fiscale o per programmi governativi e studi accademici.

Mas como solucionar o tema para a condenação de leite? Com os métodos da Somaticell, é possível, através aplicação dos métodos de análise de violação, conhecendo-se a droga envolvida na violação, alguns aspectos de caracterização da amostra analisada e o método aplicado, podermos estimar com alto grau de certeza se a amostra está acima da legislação brasileira e se o leite deve ser condenado, por violação da mesma.

In questo modo, tu che sei cliente di Somaticell, puoi usufruire di questo servizio esclusivo per applicare o meno una penale di condanna del latte, dopo aver applicato l'apposito metodo.

Quando si parla di antibiotici, una cosa che dovrebbe essere chiara è che non sono ancora stati realizzati farmaci che il corpo del bovino possa assorbire completamente, quindi i residui. Pertanto, ogni volta che questi farmaci vengono somministrati, è possibile trovare tracce della loro eliminazione nel latte.

Quindi, sulla base di questo principio, esiste una tolleranza legislativa, che consente un limite massimo di residui (LMR).

All'interno di questo universo, abbiamo il problema delle false-viole, che hanno una certa quantità di antimicrobici, tuttavia sono al di sotto dell'LMR, e quindi adatte al consumo.

Ebbene, se la normativa prevede che sia possibile mantenere la sicurezza alimentare anche in presenza di questi antibiotici, allora si scarta meno latte. 

Ma per evitare questi scarti è necessario che i produttori utilizzino consapevolmente questi antimicrobici, rispettino i tempi di smaltimento e ricordino sempre che per ogni animale si applica il limite massimo di residuo stabilito e l'analisi in vasche di raccolta o camion è una mera liberalità di l'autorità sanitaria, per stabilire un punto di controllo operativamente fattibile.

Per la rilevazione dei residui di tutti gli antibiotici venduti nel Brasil e consentito per l'uso da MAPA, conta sul Somaticell per la fornitura di kit di rilevamento. Abbiamo una copertura completa delle richieste tecniche e del supporto tecnico per aiutarvi ad applicare la legislazione nel miglior modo possibile ed economicamente vantaggioso. 

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